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UltraSensitiveTM SP免疫组化染色步骤

发布时间:2011-11-3 13:48:18

免疫组化超敏UltraSensitiveTM SP试剂盒采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及底物色素混合液来测定组织和细胞中的抗原。其染色步骤如下: 
1、石蜡切片脱蜡、水化,自来水冲洗; 
2、根据第一抗体的要求,对组织进行相应的抗原修复; 
3、除去PBS,切片上滴加过氧化物酶阻断试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3次,每次3分钟(3×3分钟); 
4、除去PBS,切片上滴加正常非免疫动物血清,室温下孵育10分钟; 
5、除去血清,切片上滴加第一抗体,室温下孵育60分钟或4℃过夜,PBS冲洗3×3分钟; 
6、除去PBS,切片上滴加生物素标记的第二抗体,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟; 
7、除去PBS,切片上滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟; 
8、除去PBS,切片上滴加新鲜配制的DAB或AEC显色试剂显色; 
9、自来水冲洗终止显色,苏木素复染,(如有必要可用1%盐酸乙醇分化),PBS返蓝。如果用DAB显色,则切片经梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,如果用AEC显色,则切片不能经乙醇脱水,而直接用水性封固剂封固。 
备注:如果组织含内源性生物素或由于抗原热修复造成内源性生物素暴露的,可以在加过氧化物酶阻断试剂之前,用内源性生物素阻断试剂盒(迈新产品编号:BLK-0001)加以阻断。
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